PCR實驗室又叫(jiao)基(ji)因擴增實(shi)驗室。PCR是聚合(he)酶(mei)鏈式反應(PolymeraseChainReaction)的(de)(de)簡稱。是一種分子(zi)生(sheng)物學技術(shu)，用(yong)于(yu)放大特(te)定(ding)的(de)(de)DNA片段(duan)，可(ke)看(kan)作生(sheng)物體(ti)外的(de)(de)特(te)殊(shu)DNA復制。用(yong)于(yu)基(ji)因檢測(ce)，具有高度敏感性(xing)、特(te)異性(xing)、快(kuai)速(su)、簡單等(deng)特(te)點，能將傳統方法難以(yi)檢測(ce)的(de)(de)極少(shao)數病(bing)(bing)毒DNA片段(duan)擴增百萬倍以(yi)上，從而大大提高疾病(bing)(bing)的(de)(de)診(zhen)斷(duan)水(shui)平。它(ta)不僅(jin)可(ke)用(yong)于(yu)基(ji)因分離、克(ke)隆和核酸序(xu)列(lie)分析等(deng)基(ji)礎(chu)研究，還可(ke)用(yong)于(yu)疾病(bing)(bing)的(de)(de)診(zhen)斷(duan)或任(ren)何有DNA，RNA的(de)(de)地方，又稱無(wu)細(xi)胞分子(zi)克(ke)隆或特(te)異性(xing)DNA序(xu)列(lie)體(ti)外引物定(ding)向酶(mei)促擴增技術(shu)。

一(yi)、PCR實驗(yan)室平面布局

PCR擴增(zeng)檢驗(yan)(yan)實驗(yan)(yan)室原則上(shang)分(fen)為三(san)個(ge)單(dan)(dan)獨的工作區(qu)域：試(shi)(shi)劑(ji)貯(zhu)存和準備(bei)(bei)區(qu)、標本(ben)制備(bei)(bei)區(qu)、擴增(zeng)和擴增(zeng)產(chan)物分(fen)析區(qu)。為避免交叉污染，進入各個(ge)工作區(qu)域必(bi)須(xu)嚴格遵(zun)循單(dan)(dan)一方向進行(xing)，即只能從試(shi)(shi)劑(ji)貯(zhu)存和準備(bei)(bei)區(qu)→標本(ben)制備(bei)(bei)區(qu)→擴增(zeng)和擴增(zeng)產(chan)物分(fen)析區(qu)。各實驗(yan)(yan)區(qu)之間的試(shi)(shi)劑(ji)及(ji)樣品(pin)傳(chuan)遞(di)應通過傳(chuan)遞(di)窗進行(xing)。

二、實驗室(shi)空(kong)調通(tong)風系統設計及壓力控制

PCR實(shi)驗(yan)(yan)室(shi)并沒(mei)有嚴格的(de)凈化等級要求，但是為避免各個實(shi)驗(yan)(yan)區(qu)域間交叉污染的(de)可能性，宜采用全送(song)全排(pai)的(de)氣(qi)流組(zu)織(zhi)形式。同時，要嚴格控制送(song)、排(pai)風的(de)比(bi)例以(yi)保(bao)證各實(shi)驗(yan)(yan)區(qu)的(de)壓(ya)力要求。

1、試劑(ji)貯存(cun)和準備區

該實(shi)驗區(qu)主(zhu)要進(jin)行的(de)操作為貯(zhu)存(cun)試劑的(de)制(zhi)備(bei)、試劑的(de)分裝和(he)主(zhu)反(fan)應(ying)混(hun)合液的(de)制(zhi)備(bei)。試劑和(he)用(yong)于樣品(pin)制(zhi)作的(de)材料應(ying)直(zhi)接運(yun)送至(zhi)該區(qu)，不(bu)得經過其他區(qu)域。試劑原材料必須貯(zhu)存(cun)在本區(qu)內，并在本區(qu)內制(zhi)備(bei)成所(suo)需的(de)貯(zhu)存(cun)試劑。對(dui)與氣流(liu)壓力的(de)控(kong)制(zhi)，本區(qu)應(ying)對(dui)外界保(bao)持微正壓。

2、標本制備區

該(gai)區(qu)域主要(yao)進行(xing)的(de)操作為(wei)樣(yang)本的(de)保(bao)存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及(ji)其加入至擴(kuo)增反應管和測定DNA的(de)合成。本區(qu)的(de)壓(ya)(ya)力梯(ti)度要(yao)求為(wei)：相對于鄰近區(qu)域為(wei)正(zheng)壓(ya)(ya)，以(yi)避免(mian)從鄰近區(qu)進入本區(qu)的(de)氣(qi)溶膠污染。另外，由(you)于在(zai)加樣(yang)操作中可能會(hui)發(fa)生氣(qi)溶膠所(suo)致的(de)污染，所(suo)以(yi)應避免(mian)在(zai)本區(qu)內不(bu)必要(yao)的(de)走動。

3、擴(kuo)增(zeng)和擴(kuo)增(zeng)產(chan)物分析區

該區域(yu)(yu)主要(yao)進(jin)行的(de)(de)操作(zuo)為DNA擴增和(he)擴增片段的(de)(de)測定。此外(wai)，已制備的(de)(de)DNA模板(來自樣本(ben)(ben)(ben)制備區)的(de)(de)加入和(he)主反應(ying)混(hun)合液(ye)(來自試劑(ji)貯存和(he)制備區)制備成反應(ying)混(hun)合液(ye)等也可在本(ben)(ben)(ben)區內進(jin)行。本(ben)(ben)(ben)區的(de)(de)壓力(li)梯度要(yao)求(qiu)為：相對于鄰近區域(yu)(yu)為負壓，以避免氣溶(rong)膠從本(ben)(ben)(ben)區漏出。為避免氣溶(rong)膠所致的(de)(de)污(wu)染，應(ying)盡量減(jian)少在本(ben)(ben)(ben)區內的(de)(de)不必要(yao)的(de)(de)走(zou)動(dong)。個別操作(zuo)如加樣等應(ying)在超凈臺內進(jin)行。

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